產(chǎn)品目錄
技術(shù)文章
當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 >
羅氏蛋白酶K的廣泛應(yīng)用及保存
更新時間:2015-08-26   點(diǎn)擊次數(shù):2719次
   羅氏蛋白酶K是一種用途廣泛的非特異性的絲氨酸蛋白酶。在pH 4到pH 12的條件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩(wěn)定。羅氏蛋白酶K常用于提取mRNA、基因組DNA,或用于從各種細(xì)胞中提純DNA和RNA時消化雜蛋白。還可用于糖蛋白的修飾,以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究等方面。

  羅氏蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛,它可以消化包圍靶DNA蛋白,因此使用羅氏蛋白酶K能夠增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會增強(qiáng)雜交信號,但在使用羅氏蛋白酶K時要注意使用的濃度,過高或者過低都會破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、核消失等影響試驗(yàn)結(jié)果。

  羅氏蛋白酶K的作用:

  蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會,提高雜交信號。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達(dá)到理想的染色效果。

  羅氏蛋白酶K的配制和保存

  推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。

  蛋白酶k配制標(biāo)準(zhǔn):20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinase K):將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。

  羅氏蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融,有效保證12月。孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。

分享到:

加入收藏 | 返回列表 | 返回頂部
北京諾博萊德科技有限公司 163ing.cn 版權(quán)所有
京ICP備12025092號-2   sitemap.xml
電話:
010-62817090
  • 點(diǎn)擊這里給我發(fā)消息
  • 點(diǎn)擊這里給我發(fā)消息
  • 點(diǎn)擊這里給我發(fā)消息

化工儀器網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站