看完本篇你就知道該如何使用MPbio土壤提取試劑了
更新時(shí)間：2021-10-13 點(diǎn)擊次數(shù)：1407次
MPbio土壤提取試劑可在30分鐘之內(nèi)，快速、有效地從土壤以及其他環(huán)境樣品中提取基因組DNA。適用于從土壤中的所有生物包括G+細(xì)菌、酵母菌、真菌、藻類、線蟲類甚至真細(xì)菌的孢子、芽孢中提取基因組DNA。
而且它還可以提取其他環(huán)境樣品的DNA，如沉積物、排泄物、廢水、雪水等。只需500mg的樣品即可得到足夠的DNA。
實(shí)驗(yàn)原理為用特殊的裂解介質(zhì)E處理樣品，之后使用自旋過濾器基于硅吸附DNA原理的GENECLEAN?步驟進(jìn)行純化，得到的DNA可用于PCR、限制性酶切、電泳及其他下游實(shí)驗(yàn)。
很多用戶對于MPbio土壤提取試劑的提取方法不是很清楚，特別是對于沒有儀器的情況下，更是感到無從下手。
為了解決用戶的煩惱，特整理了MPbio土壤提取試劑的提取方法，分享給大家，只需按照步驟操作，即使沒有儀器的情況下，也可以快速提取土壤DNA!
1、稱取0.3g~0.4g樣品加入LysingMatrixETube中。(注意：需保證加完樣品及所需溶液后，管中應(yīng)留出不少于200μL空間)
2、加入978μLSPB，加入122μLMTBuffer。
3、蓋緊LysingMatrixETube的蓋子，將離心管置于渦旋混合儀上，對管內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行震蕩破碎均質(zhì)化，時(shí)間設(shè)定為40s~50s。(注意：時(shí)間不可過長，有可能打斷基因組DNA片段降低提取質(zhì)量)從各個(gè)角度都可以震蕩一下，不要光是底部。
4、在8000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min，有利于去除體積較大或具有復(fù)雜細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的樣品碎屑。
5、將上清液用大口槍頭吸出轉(zhuǎn)入1.5mL的微離心管中，加入250μLPPS，手持離心管晃動(dòng)10次以混勻。
6、在8000r/min下離心5min，用大口槍頭將上清液轉(zhuǎn)移至5mL離心管中。
7、搖勻BindingMatrix后，吸取1.0mL加入上一步離心管中。
8、將離心管上下顛倒2min后，靜置3min，使DNA附著于BingdingMatrix上，并等待二氧化硅基質(zhì)沉淀。(這一步根據(jù)沉淀情況時(shí)間可以適當(dāng)延長)
10、將剩余的上清液與沉淀物重新混勻，吸取約600μL混合液移入SPINFilter中，8000r/min下離心1min。
11、倒掉收集管中的液體，重復(fù)上一步操作直至5mL離心管中的液體吸盡。
12、加入已制備好的SEWS-M溶液500μL，用小槍頭小心混勻后，8000r/min下離心1min后，棄去收集管中的液體。
13、為更好的去除雜離子，重復(fù)第12步，更換為1.5mL離心管。
14、在8000r/min下離心2min，去除殘留的SEWS-M溶液，然后更換為干凈的1.5mL離心管。(若發(fā)現(xiàn)殘余溶液較多，可重復(fù)此步驟)
15、在室溫下，將SPINFilter風(fēng)干5min。(時(shí)間可以更久一些)
16、往SPINFilter加入80μLDES溶液，用小槍頭小心使之與BindingMatrix混勻，65℃水浴15min(有利于DNA的溶出)。8000r/min下離心2min，可得到約50μL的DNA溶液。再加入80μLDES溶液重復(fù)第16步操作，一共可得到約100μL的DNA溶液。
17、棄去SPINFilter，將提取好的DNA存于-20℃冰箱保存。
