FITC標記套裝
本套裝是將FITC標記的常用試劑集合為一體而成。適合于蛋白等含有氨基物質的標記。特別是抗體的標記。如果待標記物分子量太?。ㄈ缧∮?KD),可能并不適合用此套裝(主要是后期純化去除未標記上的FITC,可選用透析袋)。
FITC標記套裝
P1150 FITC標記套裝 NobleRyder 一套 640
FITC標記套裝
組成 | 規(guī)格 | 保存條件 |
FITC | 10mg | -20℃ |
DMSO | 10ml | RT |
0.2M PH9.5 CB | 100ml | 2-8℃ |
1M NH4Cl | 1ml | 2-8℃ |
Sephadex G-25 | 100ml(約50%含量) | 2-8℃ |
層析空柱(10ml) | 一套 | RT |
透析袋MD25(8000-14000) | 20CM | 2-8℃ |
鐵夾(夾透析袋) | 兩支 | RT |
保存條件:FITC -20度保存,其他常溫保存。
產品說明:本套裝是將FITC標記的常用試劑集合為一體而成。適合于蛋白等含有氨基物質的標記。特別是抗體的標記。
如果待標記物分子量太?。ㄈ缧∮?KD),可能并不適合用此套裝(主要是后期純化去除未標記上的FITC,可選用透析袋)。
標記原理:在高PH下FITC可蛋白等分子的氨基相連,形成共價健。
操作方法:
一,標記量的計算:FITC分子量為389.4。一般為FITC:待標記物=10:1左右。比如抗體IgG分子量一般為150-160KD。則1mg HRP可標記抗體40mg之間。
二,計算好各步反應時間。作好開始標記的準備工作。因為標記是在PH為9.5的條件下反應,如果待標記物本身鹽含量很低并且緩沖力差,如生理鹽水,可等二天再準備。如果不確定,將0.2M PH9.5 CB稀釋20倍,作為透析液,將待標記物裝入透析袋中4℃透析過夜,透析袋適當留長約1ml體積的量以備第二天加入酶(透析袋用雙蒸水清洗三次,祥細使用請見附錄)。
三,如果樣品緩沖能力很?。ü腆w可用水溶解),加入1/20體積的0.2M PH9.5 CB,混勻。
四,準備層析柱(使用方法見附錄)。
五,在樣品準備好的情況下,稱量2mg左右FITC(請不要一次稱量過小,稱量過小時,誤差會很大),加入1ml DMSO溶解。取適量溶解好的FITC,加入準備好的樣品迅速混勻。避光常溫反應兩小時或者4℃反應過夜。
六,過柱。請保證總溶液體積不超過總體積的1/5。比較理想的是在1/10。也就是10ml凝膠,zui多過柱1ml的標記液(此步也可以改為透析。一般避光透析兩天左右,到沒有明顯黃色出來為止)。 。
七, 加入1/20體積的1M NH4Cl,避光4℃反應兩小時
附透析袋使用方法:
本透析袋已預處理過,用雙蒸水清洗后將水用適當吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用鐵夾,但如果鐵夾不夠用,下部可用細線或者其他的透析袋夾。
將透析袋輕輕的折上兩到三折。用線或者透析袋夾封住,上面支開,加入待透析物,留一定量的空氣在頂上,并小心的折一折,用鐵夾夾住,輕輕的擠壓,如沒發(fā)現有液體流出,可放入透析液中。一般透析可用純凈水瓶去頂使用。用一次性筷子或者其他合適物穿過鐵夾,將透析袋吊在透析液中,補充透析液,使透析液蓋過透析袋中的液面而不要淹過鐵夾下面。
分子篩柱使用方法:
取空柱,加入雙蒸水沖洗三次,找一合適的地方架好,下面收集廢液,將Sephadex G-25取出搖勻,輕輕的沿壁倒入柱中(用去尖移液器加入也可以),等液體流出少量時,不停的補加凝膠到一合適的體積。一般加到10ml左右。在上口留出1-2ml空間。灌完膠后,用三倍體積的雙蒸水沖洗(從上面加入,下面自動流出),再用合適的緩沖液沖洗三倍體積(如生理鹽水或者PBS等)。
當zui后一次加緩沖液后,把柱上層弄平整。等上層溶液*流完,就可以加入待過柱的標記液。用去尖吸頭小心的中空滴加,如果一次加不完,等流出少量后再加,一直加完。待標記物*流干后,再加入少量約3-5滴緩沖液(如生理鹽水或者PBS等),流完再加,如此三次左右,接著就可以一次加入1-2ml緩沖液(如生理鹽水或者PBS等)。加到一定體積后,可以看到柱中黃色會分層。收集下層溶液,加入適當的穩(wěn)定劑等,定溶。備用。
用過的凝膠可以丟棄或者重復使用(如果重復使用,須用大量的緩沖液沖洗,待上層黃色*流走。折中的方法是小心的將上層黃色膠挖掉。流下層的回收)
P0910 | 0.01M PBS(干粉) PH7.2-7.4 | NobleRyder | 2L | 8.00 |
P0930 | 0.1%胰蛋白酶液消化液 | NobleRyder | 10ml | 120.00 |
A0970 | 10×多聚賴氨酸溶液(免疫組化) | NobleRyder | 10ml | 260.00 |
A0980 | 4%多聚甲醛 | NobleRyder | 100/500ml | 60.00/200.00 |
A0940 | AEC顯色試劑盒(20×) | NobleRyder | 1ml/10ml | 100.00/400.00 |
A0960 | BCIP/NBT顯色試劑盒 | NobleRyder | 100ml | 380.00 |
A0950 | DAB顯色試劑盒(20×) | NobleRyder | 3ml | 100.00 |
P1150 | FITC標記套裝 | NobleRyder | 一套 | 640 |
P0010 | Mayer';蘇木素染液 | NobleRyder | 10ml/100ml/500ml | 60.00/240.00/680.00 |
P1140 | 抗體稀釋液(一抗稀釋液) | NobleRyder | 10ml/100ml | 40/280 |
A0990 | 抗熒光衰減封片劑 | NobleRyder | 5ml/25ml | 70.00/240 |
P1100 | 辣根過氧化物酶(HRP)標記套裝 | NobleRyder | 一套 | 560 |
P0020 | 檸檬酸鈉緩沖液0.01mol/L,pH6.0, | NobleRyder | 1L | 8.00 |